高糖条件下人视网膜色素上皮细胞的上皮一间质转化

更新时间:2015-08-17

【摘要】背景研究证实，有多种细胞参与增生性玻璃体视网膜病变( PVR)的发生和发展过程，其中RPE细胞的上皮一间质转化(EMT)可能与PVR有关，其主要生物学行为是RPE细胞的增生和迁移。已证实高血糖是糖尿病视网膜病变( DR)发病的主要原因，而高糖条件下RPE细胞是否发牛EMT鲜有报道。  目的建立体外高糖细胞培养模型，探讨高糖对人RPE的迁移能力及EMT的影响。  方法  用含质量分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基对人RPE细胞D407细胞株进行体外培养和传代，取6—8代细胞用于实验。依据培养液中血糖浓度的不同将细胞分为3个组，正常对照组培养基中葡萄糖终浓度为5.5 mmol/L，高糖培养组葡萄糖终浓度为60.0 mmol/L，用含5.5 mmol/L葡萄糖和甘露醇的DMEM培养基培养细胞作为高渗对照组。采用细胞划痕试验法检测划痕后0、24、48和72 h时3个组RPE细胞的迁移率，用实时芡光定量PCR( real-time PCR)检测高糖培养组在培养不同时问点RPE细胞问质化标志物闭锁小带蛋白一l（ZO-1）和“一平滑肌肌动蛋白( a-SMA) mRNA在细胞中的相对表达水平。  结果正常对照组培养的RPE细胞呈多角形，核仁清晰，排列致密；高糖培养组随着培养时问的延长，RPE细胞逐渐变大、变长，细胞结构不清，排列紊乱；渗对照组细胞结构接近正常对照组。划痕试验显示，高糖培养组在划痕后48 h口J见细胞迁移，划痕后72 h划痕基本消失，而正常对照组和高渗对照组划痕仍然存在。划痕后各时间点高糖培养组细胞迁移率明显高于正常对照组和高渗对照组，组间和各时问点的差异均有统计学意义(Fwu= 328. 600，P=0.000；Fu.ru= 773. 270，P=0. 000)。RT-PCR结果显示，与正常对照组相比，高糖培养后48 h、72 h组细胞中ZO-1 mRNA的表达水平明显低于正常对照组，而a-SMAmRNA的表达水平明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（均P<O. 05）。结论高糖条件下RPE细胞的迁移能力增强，发生EMT改变，可能参与增牛性糖尿病视网膜病变(PDR)的发生。

【关键词】 人 视网膜色索上皮细胞 高糖 上皮一间质转化 糖尿病／并发症 视网膜病变 细胞培养

阅读全文