Hrdl转基因小鼠的构建与验证

更新时间:2015-08-17

【摘要】内质网应激在糖尿病视网膜病变( DR)中发挥着重要作用。羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白l（Hrdl，又名Syvnl）作为一种内质网相关蛋白降解(ERAD)途径中的核心蛋白，能够减少内质网应激。  目的构建Hrdl高表达小鼠，为今后研究Hrdl在DR中的作用提供动物模型。  方法  构建Hrdl系统表达重组质粒，酶切、测序后显微注射3 pl到685枚C57BL/6小鼠受精卵中，移植到代孕母鼠，得到Hrdl转基因小鼠。利用鼠尾PCR检测法鉴定FO代小鼠的基因型。得到Hrdl基因检测m性鼠后，使其分别与野生型鼠杂交，得到Fl代Hrdl转基因小鼠，取鼠尾组织，用PCR检测法再次鉴定Fl代小鼠基因型。  结果成功构建了Hrdl重组载体，重组质粒pRP．ExBi-EFla-Syvnl-IRES-eCFP的全序列测定结果显示，cDNA序列均正确。接受了Hrdl-pcDNA显微注射的685枚受精卯申成活598枚。将存活的受精卵移植到代孕母鼠后共产子鼠41只，获FO代子鼠8只，牛理活动均良好。PCR电泳显示339 bp处m性条带，该基因型pJ以传递到子代Fl。  结论成功构建了Hrdl转基因小鼠。

【关键词】 羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白l 小鼠／转基因 内质网应激 糖尿病视网膜病变

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